PRP modern: "PRP kliniku"
Fl-aħħar 10 snin, l-iskema ta 'trattament ta' PRP għaddiet minn bidliet kbar.Permezz ta 'riċerka sperimentali u klinika, issa għandna fehim aħjar tal-plejtlits u fiżjoloġija taċ-ċelluli oħra.Barra minn hekk, bosta evalwazzjonijiet sistematiċi ta 'kwalità għolja, meta-analiżi u provi kkontrollati randomised urew l-effettività tal-bijoteknoloġija PRP f'ħafna oqsma mediċi, inklużi dermatoloġija, kirurġija kardijaka, kirurġija plastika, kirurġija ortopedika, ġestjoni tal-uġigħ, mard tas-sinsla, u mediċina sportiva. .
Il-karatteristika attwali ta' PRP hija l-konċentrazzjoni assoluta ta' plejtlits tiegħu, li tinbidel mid-definizzjoni inizjali ta' PRP (inkluża konċentrazzjoni ta' plejtlits ogħla mill-valur tal-linja bażi) għal aktar minn 1 × 10 6/µ L jew madwar 5 darbiet il-konċentrazzjoni minima ta' plejtlits fi plejtlits minn linja bażi.Fir-reviżjoni estensiva minn Fadadu et al.Ġew evalwati 33 sistema PRP u protokoll.L-għadd tal-plejtlits tal-preparazzjoni finali PRP prodotta minn xi wħud minn dawn is-sistemi huwa inqas minn dak tad-demm sħiħ.Huma rrappurtaw li l-fattur tal-plejtlits tal-PRP żdied baxx daqs 0.52 bil-kit ta 'spin wieħed (Selphyl ®).B'kuntrast, EmCyte Genesis PurePRPII ® b'rotazzjoni doppja Il-konċentrazzjoni tal-plejtlits prodotta mill-apparat hija l-ogħla (1.6 × 10 6 /µL).
Ovvjament, il-metodi in vitro u l-annimali mhumiex l-ambjent ta 'riċerka ideali għal trasformazzjoni b'suċċess fi prattika klinika.Bl-istess mod, l-istudju tat-tqabbil tal-apparat ma jappoġġjax id-deċiżjoni, minħabba li juru li l-konċentrazzjoni tal-plejtlits bejn l-apparati PRP hija differenti ħafna.Fortunatament, permezz ta 'teknoloġija u analiżi bbażati fuq il-proteomika, nistgħu nżidu l-fehim tagħna tal-funzjonijiet taċ-ċelluli fil-PRP li jaffettwaw ir-riżultati tat-trattament.Qabel ma jintlaħaq kunsens dwar preparazzjonijiet u formulazzjonijiet PRP standardizzati, PRP għandu jsegwi formulazzjonijiet kliniċi PRP biex jippromwovi mekkaniżmi sostanzjali ta 'tiswija tat-tessuti u riżultati kliniċi progressivi.
Formula klinika PRP
Fil-preżent, PRP klinika effettiva (C-PRP) ġiet ikkaratterizzata bħala kompożizzjoni kumplessa ta 'komponenti multiċellulari awtologi fi plażma ta' volum żgħir miksuba minn parti tad-demm periferali wara ċ-ċentrifugazzjoni.Wara ċ-ċentrifugazzjoni, PRP u l-komponenti taċ-ċelluli mhux tal-plejtlits tiegħu jistgħu jiġu rkuprati mill-apparat ta 'konċentrazzjoni skond densitajiet differenti taċ-ċelluli (li minnhom id-densità tal-plejtlits hija l-aktar baxxa).
Uża tagħmir ta 'separazzjoni tad-densità taċ-ċelluli PurePRP-SP ® (EmCyte Corporation, Fort Myers, FL, USA) intuża għal demm sħiħ wara żewġ proċeduri ta' ċentrifugazzjoni.Wara l-ewwel proċess ta 'ċentrifugazzjoni, il-komponent tad-demm kollu ġie separat f'żewġ saffi bażiċi, sospensjoni tal-plażma tal-plejtlets (dgħif) u saff taċ-ċelluli ħomor tad-demm.F'A, it-tieni pass taċ-ċentrifugazzjoni tlesta.Il-volum PRP attwali jista 'jiġi estratt għall-applikazzjoni tal-pazjent.L-ingrandiment f'B juri li hemm saff ta 'sedimentazzjoni ta' eritroċiti b'ħafna komponenti organizzat (rappreżentat minn linja blu) fil-qiegħ tat-tagħmir, li fih konċentrazzjonijiet għoljin ta 'plejtlits, monoċiti u limfoċiti, ibbażati fuq il-gradjent tad-densità.F'dan l-eżempju, skont il-protokoll ta 'preparazzjoni C-PRP b'newtrofili foqra, il-perċentwal minimu ta' newtrofili (<0.3%) u eritroċiti (<0.1%) se jiġu estratti.
Granuli tal-plejtlits
Fl-applikazzjoni klinika bikrija tal-PRP, α- Granuli huma l-istruttura interna tal-plejtlits l-aktar komunement iċċitata, minħabba li fihom fatturi ta 'koagulazzjoni, numru kbir ta' PDGF u regolaturi anġjoġeniċi, iżda għandhom ftit funzjoni tromboġenika.Fatturi oħra jinkludu chemokine u komponenti taċ-ċitokini inqas magħrufa, bħall-fattur tal-plejtlits 4 (PF4), proteina bażika ta’ qabel il-plejtlits, P-selectin (attivatur tal-integrin) u chemokine RANTES (irregolat b’attivazzjoni, li jesprimi ċelluli T normali u preżumibbilment). sekrezzjoni).Il-funzjoni ġenerali ta 'dawn il-komponenti tal-granuli tal-plejtlits speċifiċi hija li jirreklutaw u jattivaw ċelluli immuni oħra jew jinduċu infjammazzjoni taċ-ċelluli endoteljali.
Komponenti granulari densi bħal ADP, serotonin, polifosfat, istamina u adrenalina jintużaw b'mod aktar impliċitu bħala regolaturi ta 'attivazzjoni tal-plejtlits u trombożi.L-aktar importanti, ħafna minn dawn l-elementi għandhom il-funzjoni li jimmodifikaw iċ-ċelloli immuni.L-ADP tal-plejtlets huwa rikonoxxut mir-riċettur P2Y12ADP fuq ċelluli dendritiċi (DC), u b'hekk tiżdied l-endoċitożi tal-antiġen.DC (ċellula li tippreżenta l-antiġen) hija importanti ħafna biex tibda r-rispons immuni taċ-ċelluli T u tikkontrolla r-rispons immuni protettiv, li torbot is-sistema immuni intrinsika u s-sistema immuni adattiva.Barra minn hekk, platelet adenosine triphosphate (ATP) jibgħat sinjali permezz tar-riċettur taċ-ċelluli T P2X7, li jwassal għal divrenzjar akbar ta 'ċelluli CD4 T helper f'ċelluli T helper 17 (Th17) proinfjammatorji.Komponenti oħra tal-granuli densi tal-plejtlits (bħal glutamate u serotonin) jinduċu migrazzjoni taċ-ċelluli T u jżidu d-differenzazzjoni tal-monoċiti għal DC, rispettivament.Fil-PRP, dawn l-immunomodulaturi derivati minn partiċelli densi huma arrikkit ħafna u għandhom funzjonijiet immuni sostanzjali.
In-numru ta' interazzjonijiet potenzjali diretti u indiretti bejn il-plejtlits u ċelloli oħra (riċetturi) huwa estensiv.Għalhekk, l-applikazzjoni ta 'PRP fl-ambjent tat-tessut patoloġiku lokali tista' tinduċi varjetà ta 'effetti infjammatorji.
Konċentrazzjoni tal-plejtlits
C-PRP għandu jkun fih dożi kliniċi ta' plejtlits ikkonċentrati biex jipproduċu effetti terapewtiċi ta' benefiċċju.Il-plejtlits f'C-PRP għandhom jistimulaw il-proliferazzjoni taċ-ċelluli, is-sintesi ta 'fatturi mesenkimali u newrotrofiċi, jippromwovu l-migrazzjoni ta' ċelloli kimotattiċi u jistimulaw l-attività immunoregolatorja, kif muri fil-figura.
Plejtlits attivati, rilaxx ta 'PGF u molekuli ta' adeżjoni jimmedjaw varjetà ta 'interazzjonijiet taċ-ċelluli: kimotassi, adeżjoni taċ-ċelluli, migrazzjoni u differenzjazzjoni taċ-ċelluli, u jirregolaw attivitajiet regolatorji immuni.Dawn l-interazzjonijiet taċ-ċelluli tal-plejtlits jikkontribwixxu għall-anġjoġenesi u l-attività infjammatorja, u fl-aħħar mill-aħħar jistimulaw il-proċess tat-tiswija tat-tessuti.Abbrevjazzjonijiet: BMA: aspirat tal-mudullun, EPC: ċelluli proġenitriċi endoteljali, EC: ċelluli endoteljali, 5-HT: 5-hydroxytryptamine, RANTES: regolazzjoni attivata ta 'espressjoni normali taċ-ċelluli T u sekrezzjoni putattiva, JAM: tip ta' molekula ta 'adeżjoni tal-junction, CD40L: cluster 40 ligand, SDF-1 α: fattur derivat minn ċelluli stromali-1 α， CXCL: chemokine (CXC motif) ligand, PF4: fattur tal-plejtlets 4. Adattat minn Everts et al.
Marx kien l-ewwel persuna li pprova li l-fejqan tal-għadam u tat-tessut artab kien imsaħħaħ, u l-għadd minimu tal-plejtlits kien 1 × 10 6 /µL。 Dawn ir-riżultati ġew ikkonfermati fi studju tal-fużjoni lumbari permezz tal-foramen intervertebrali, meta d-doża tal-plejtlits kienet akbar minn 1.3 × F'106 plejtlits/µ L, dan l-istudju wera aktar fużjoni.Barra minn hekk, Giusti et al.Kixfet 1.5 × Il-mekkaniżmu tat-tiswija tat-tessuti f'doża ta '109 jeħtieġ plejtlits/mL biex jinduċi anġjoġenesi funzjonali permezz ta' attività taċ-ċelluli endoteljali.Fl-istudju tal-aħħar, konċentrazzjonijiet ogħla naqqsu l-potenzjal tal-anġjoġenesi tal-plejtlits fil-follikuli u madwarhom.Barra minn hekk, dejta preċedenti wriet li d-doża ta 'PRP taffettwa wkoll ir-riżultati tat-trattament.Għalhekk, sabiex jinduċi b'mod sinifikanti reazzjoni ta 'anġjoġenesi u jistimula l-proliferazzjoni taċ-ċelluli u l-migrazzjoni taċ-ċelluli, C-PRP għandu jkun fih mill-inqas 7.5 fi flixkun ta' trattament PRP ta '5-mL × 10 9 jista' jwassal plejtlits.
Minbarra d-dipendenza fuq id-doża, l-effett tal-PRP fuq l-attività taċ-ċelluli jidher li jiddependi ħafna mill-ħin.Sophie et al.Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-espożizzjoni għal żmien qasir għal lisati tal-plejtlits umani tista 'tistimula l-proliferazzjoni taċ-ċelluli tal-għadam u l-kimotassi.Għall-kuntrarju, espożizzjoni fit-tul għall-PRP se twassal għal livelli aktar baxxi ta 'fosfatażi alkalina u formazzjoni minerali.
Ċellula ħamra tad-demm
Iċ-ċelluli ħomor tad-demm huma responsabbli għat-trasport tal-ossiġnu għat-tessuti u t-trasferiment tad-dijossidu tal-karbonju mit-tessuti għall-pulmuni.M'għandhomx nukleu u huma komposti minn molekuli heme li jorbtu mal-proteini.Il-komponenti tal-ħadid u heme fiċ-ċelluli ħomor tad-demm jippromwovu l-kombinazzjoni ta 'ossiġnu u dijossidu tal-karbonju.Ġeneralment, iċ-ċiklu tal-ħajja taċ-ċelluli ħomor tad-demm huwa ta 'madwar 120 jum.Dawn jitneħħew miċ-ċirkolazzjoni mill-makrofaġi permezz ta 'proċess imsejjaħ RBC aging.Iċ-ċelluli ħomor tad-demm f'kampjuni PRP jistgħu jiġu mħassra taħt kundizzjonijiet ta 'shear (per eżempju, kirurġija ta' fsada tad-demm sħiħ, proċess medjat mill-immunità, stress ossidattiv jew skema ta 'konċentrazzjoni PRP inadegwata).Għalhekk, il-membrana taċ-ċelluli RBC tiddekomponi u tirrilaxxa l-emoglobina tossika (Hb), imkejla mill-emoglobina ħielsa mill-plażma (PFH), heme u ħadid.].PFH u l-prodotti ta 'degradazzjoni tiegħu (heme u ħadid) flimkien iwasslu għal effetti ta' ħsara u ċitotossiċi fuq it-tessuti, li jwasslu għal stress ossidattiv, telf ta 'ossidu nitriku, attivazzjoni ta' mogħdijiet infjammatorji u immunosoppressjoni.Dawn l-effetti eventwalment se jwasslu għal disfunzjoni tal-mikroċirkolazzjoni, vażokostrizzjoni lokali u korriment vaskulari, kif ukoll ħsara serja fit-tessuti.
L-iktar ħaġa importanti hija li meta l-RBC li jkun fih C-PRP jiġi kkunsinnat lit-tessut, se jikkawża reazzjoni lokali msejħa eryptosis, li tixpruna r-rilaxx ta 'inibitur effettiv tal-migrazzjoni taċ-ċitokini u l-makrofagi.Dan iċ-ċitokin jinibixxi l-migrazzjoni ta 'monoċiti u makrofaġi.Jeżerċita sinjali pro-infjammatorji qawwija għat-tessuti tal-madwar, jinibixxi l-migrazzjoni taċ-ċelluli staminali u l-proliferazzjoni tal-fibroblasti, u jwassal għal disfunzjoni sinifikanti taċ-ċelluli lokali.Għalhekk, huwa importanti li tiġi limitata l-kontaminazzjoni RBC fil-preparazzjonijiet PRP.Barra minn hekk, ir-rwol taċ-ċelluli ħomor tad-demm fir-riġenerazzjoni tat-tessuti qatt ma ġie determinat.Proċess adegwat ta 'ċentrifugazzjoni u preparazzjoni C-PRP normalment inaqqsu jew saħansitra jeliminaw il-preżenza ta' ċelluli ħomor tad-demm, u b'hekk jiġu evitati l-konsegwenzi avversi ta 'emolisi u polycythemia.
Lewkoċiti f'C-PRP
Il-preżenza ta 'ċelluli bojod tad-demm fil-preparazzjonijiet PRP tiddependi fuq it-tagħmir tat-trattament u l-iskema ta' preparazzjoni.F'tagħmir PRP ibbażat fuq il-plażma, iċ-ċelluli bojod tad-demm huma kompletament eliminati;Madankollu, iċ-ċelluli bojod tad-demm kienu kkonċentrati b'mod sinifikanti fil-preparazzjoni PRP tas-saff kannella tas-sedimentazzjoni tal-eritroċiti.Minħabba l-mekkaniżmi ta 'difiża immuni u ospitanti, iċ-ċelluli bojod tad-demm jaffettwaw ħafna l-bijoloġija interna tal-kundizzjonijiet tat-tessuti akuti u kroniċi.Dawn il-karatteristiċi se jiġu diskussi aktar hawn taħt.Għalhekk, il-preżenza ta 'lewkoċiti speċifiċi f'C-PRP tista' tikkawża effetti ċellulari u tat-tessuti sinifikanti.B'mod aktar speċifiku, sistemi differenti ta 'saff ta' sedimentazzjoni ta 'eritroċiti PRP kannella-isfar jużaw skemi ta' preparazzjoni differenti, u b'hekk jipproduċu proporzjon differenti ta 'newtrofili, limfoċiti u monoċiti fil-PRP.L-eosinofili u l-bażofili ma jistgħux jitkejlu fi preparazzjonijiet PRP minħabba li l-membrani taċ-ċelluli tagħhom huma fraġli wisq biex jifilħu forzi ta 'proċessar ċentrifugali.
Newtrofili
In-newtrofili huma lewkoċiti essenzjali f'ħafna mogħdijiet ta' fejqan.Dawn il-mogħdijiet jikkombinaw ma 'proteini antimikrobiċi preżenti fil-plejtlits biex jiffurmaw barriera densa kontra patoġeni invażivi.L-eżistenza ta 'newtrofili hija determinata skond il-mira tat-trattament ta' C-PRP.Livelli miżjuda ta 'infjammazzjoni tat-tessuti jistgħu jkunu meħtieġa fil-bijoterapija PRP għall-kura tal-feriti kronika jew f'applikazzjonijiet immirati lejn it-tkabbir jew il-fejqan tal-għadam.B'mod importanti, instabu funzjonijiet addizzjonali tan-newtrofili f'diversi mudelli, li jenfasizzaw ir-rwol tagħhom fl-anġjoġenesi u t-tiswija tat-tessuti.Madankollu, in-newtrofili jistgħu wkoll jikkawżaw effetti ta 'ħsara, għalhekk mhumiex adattati għal xi applikazzjonijiet.Zhou u Wang wrew li l-użu ta 'PRP rikk fin-newtrofili jista' jwassal għal żieda fil-proporzjon tal-kollaġen tat-tip III għal kollaġen tat-tip I, u b'hekk jaggrava l-fibrożi u jnaqqas is-saħħa tal-għerq.Karatteristiċi oħra ta 'ħsara medjati minn newtrofili huma r-rilaxx ta' ċitokini infjammatorji u metalloproteinases matriċi (MMPs), li jistgħu jippromwovu l-infjammazzjoni u l-kataboliżmu meta jiġu applikati għat-tessuti.
Lewkomonoċiti
F'C-PRP, limfoċiti T u B mononukleari huma aktar ikkonċentrati minn kwalunkwe ċellula bojod tad-demm oħra.Huma relatati mill-qrib mal-immunità adattiva ċitotossika medjata miċ-ċelluli.Il-limfoċiti jistgħu jikkawżaw reazzjonijiet taċ-ċelluli biex jiġġieldu l-infezzjoni u jadattaw għall-invażuri.Barra minn hekk, ċitokini derivati minn limfoċiti T (interferon- γ [IFN- γ] U interleukin-4 (IL-4) itejbu l-polarizzazzjoni tal-makrofaġi. Verassar et al. Huwa ppruvat li l-limfoċiti T konvenzjonali jistgħu indirettament jippromwovu l-fejqan tat-tessuti f' il-mudell tal-ġurdien billi jirregola d-differenzjazzjoni tal-monoċiti u l-makrofaġi.
Monocyte - ċellula tat-tiswija multipotenti
Skont l-apparat tal-preparazzjoni PRP użat, il-monoċiti jistgħu joħorġu jew ma jeżistux fil-flixkun tat-trattament PRP.Sfortunatament, il-prestazzjoni tagħhom u l-kapaċità ta 'riġenerazzjoni rari huma diskussi fil-letteratura.Għalhekk, ftit attenzjoni tingħata lill-monoċiti fil-metodu ta 'preparazzjoni jew formula finali.Il-grupp tal-monoċiti huwa eteroġenju, li joriġina minn ċelluli proġenitriċi fil-mudullun, u ttrasportat lejn tessuti periferali permezz tal-mogħdija taċ-ċelluli staminali ematopojetiċi skont l-istimulazzjoni tal-mikroambjent.Matul l-omeostasi u l-infjammazzjoni, il-monoċiti li jiċċirkolaw iħallu n-nixxiegħa tad-demm u jiġu rreklutati għal tessuti midruba jew degradati.Jistgħu jaġixxu bħala makrofaġi (M Φ) ċelluli effetturi jew ċelluli proġenitriċi.Il-monoċiti, il-makrofaġi u ċ-ċelloli dendritiċi jirrappreżentaw is-sistema fagoċitika mononukleari (MPS).. Karatteristika tipika tal-MPS hija l-plastikità tal-mudell tal-espressjoni tal-ġeni tagħha u l-koinċidenza funzjonali bejn dawn it-tipi ta 'ċelluli.F'tessuti deġenerati, makrofaġi residenti, fatturi ta 'tkabbir li jaġixxu lokalment, ċitokini pro-infjammatorji, ċelloli apoptotiċi jew nekrotiċi u prodotti mikrobjali jibdew monoċiti biex jiddifferenzjaw fi gruppi ta' ċelluli MPS.Ejja ngħidu li meta C-PRP li jkun fih monoċiti ta 'rendiment għoli jiġi injettat fil-mikroambjent lokali tal-marda, il-monoċiti x'aktarx jiddifferenzjaw f'M Φ Biex jikkawżaw bidliet kbar fiċ-ċelluli.
Minn monocyte għal M Φ Fil-proċess ta 'trasformazzjoni, speċifiku M Φ Fenotip.Fl-aħħar għaxar snin, ġie żviluppat mudell, li jintegra M Φ Il-mekkaniżmu kumpless ta 'attivazzjoni huwa deskritt bħala polarizzazzjoni ta' żewġ stati opposti: M Φ Fenotip 1 (M Φ 1, Attivazzjoni Classic) u M Φ Fenotip 2 (M Φ 2, attivazzjoni alternattiva).M Φ 1 huwa kkaratterizzat minn sekrezzjoni ta 'ċitokini infjammatorji (IFN- γ) U ossidu nitriku biex jipproduċi mekkaniżmu effettiv ta' qtil tal-patoġenu.M Φ Il-fenotip jipproduċi wkoll fattur tat-tkabbir endoteljali vaskulari (VEGF) u fattur tat-tkabbir tal-fibroblast (FGF).M Φ Il-fenotip huwa magħmul minn ċelluli anti-infjammatorji b'fagoċitożi għolja.M Φ 2 Jipproduċi komponenti tal-matriċi extraċellulari, anġjoġenesi u chemokines, u interleukin 10 (IL-10).Minbarra d-difiża tal-patoġenu, M Φ Jista 'wkoll inaqqas l-infjammazzjoni u jippromwovi t-tiswija tat-tessuti.Ta 'min jinnota li M Φ 2 ġie suddiviż f'M in vitro Φ 2a、M Φ 2b u M Φ 2. Jiddependi fuq l-istimolu.It-traduzzjoni in vivo ta' dawn is-sottotipi hija diffiċli minħabba li t-tessut jista' jkun fih Gruppi M Φ mħallta.Interessanti, ibbażati fuq sinjali ambjentali lokali u livelli IL-4, proinfjammatorji M Φ 1 jistgħu jiġu kkonvertiti biex jippromwovu t-tiswija M Φ 2。 Minn din id-dejta, huwa raġonevoli li wieħed jassumi li hemm konċentrazzjonijiet għolja ta 'monoċiti u preparazzjonijiet M Φ C-PRP. jistgħu jikkontribwixxu għal tiswija aħjar tat-tessuti minħabba li għandhom tiswija tat-tessuti anti-infjammatorji u kapaċitajiet ta 'trasduzzjoni tas-sinjal taċ-ċelluli.
Definizzjoni konfuża tal-frazzjoni taċ-ċelluli bojod tad-demm fil-PRP
Il-preżenza ta 'ċelluli bojod tad-demm fil-fliexken tat-trattament PRP tiddependi fuq l-apparat ta' preparazzjoni PRP u jista 'jkollha differenzi sinifikanti.Hemm ħafna tilwim dwar l-eżistenza tal-lewkoċiti u l-kontribut tagħhom għal prodotti sub-PRP differenti (bħal PRGF, P-PRP, LP-PRP, LR-PRP, P-PRF u L-PRF) F'reviżjoni reċenti, sitt randomizzati provi kkontrollati (livell ta' evidenza 1) u tliet studji komparattivi prospettivi (livell ta' evidenza 2) involvew 1055 pazjent, li jindikaw li LR-PRP u LP-PRP kellhom sigurtà simili.L-awtur ikkonkluda li r-reazzjoni avversa ta 'PRP tista' ma tkunx direttament relatata mal-konċentrazzjoni taċ-ċelluli bojod tad-demm.Fi studju ieħor, LR-PRP ma biddilx l-interleukin infjammatorju (IL-1) fl-irkoppa OA β、 IL-6, IL-8 u IL-17).Dawn ir-riżultati jappoġġjaw il-fehma li r-rwol tal-lewkoċiti fl-attività bijoloġika tal-PRP in vivo jista 'jiġi mill-crosstalk bejn il-plejtlits u l-lewkoċiti.Din l-interazzjoni tista 'tippromwovi l-bijosintesi ta' fatturi oħra (bħal lipoxygen), li jistgħu jikkumpensaw jew jippromwovu r-rigressjoni ta 'infjammazzjoni.Wara r-rilaxx inizjali ta 'molekuli infjammatorji (aċidu arakidoniku, leukotriene u prostaglandin), lipoxygen A4 jiġi rilaxxat minn plejtlits attivati biex jipprevjeni l-attivazzjoni tan-newtrofili.Huwa f'dan l-ambjent li M Φ Fenotip minn M Φ 1 Aqleb għal M Φ 2。 Barra minn hekk, hemm evidenza dejjem tiżdied li ċ-ċelloli mononukleari li jiċċirkolaw jistgħu jiddifferenzjaw f'varjetà ta 'tipi ta' ċelluli mhux fagoċitiċi minħabba l-pluripotenza tagħhom.
It-tip ta 'PRP se jaffettwa l-kultura MSC.Meta mqabbel ma 'kampjuni PRP jew PPP pur, LR-PRP jista' jinduċi proliferazzjoni ogħla b'mod sinifikanti ta 'MSCs derivati mill-mudullun (BMMSCs), b'rilaxx aktar mgħaġġel u attività bijoloġika aħjar tal-PGF.Dawn il-karatteristiċi kollha jwasslu biex iż-żieda ta 'monoċiti fil-flixkun tat-trattament PRP u għar-rikonoxximent tal-kapaċità immunomodulatorja u l-potenzjal ta' differenzjazzjoni tagħhom.
Regolazzjoni immuni konġenitali u adattiva tal-PRP
L-iktar funzjoni fiżjoloġika famuża tal-plejtlits hija li tikkontrolla l-fsada.Jakkumulaw fis-sit tal-ħsara fit-tessuti u l-vini tad-demm bil-ħsara.Dawn l-avvenimenti huma kkawżati mill-espressjoni ta' integrini u seletini li jistimulaw l-adeżjoni u l-aggregazzjoni tal-plejtlits.L-endotelju bil-ħsara jkompli jaggrava dan il-proċess, u l-kollaġen esposti u proteini oħra tal-matriċi subendoteljali jippromwovu l-attivazzjoni profonda tal-plejtlits.F'dawn il-każijiet, ġie ppruvat ir-rwol importanti tal-interazzjoni bejn il-fattur von Willebrand (vWF) u l-glikoproteina (GP), speċjalment GP-Ib.Wara l-attivazzjoni tal-plejtlits, il-plejtlets α-、 Dens, liżosomi u T-granuli jirregolaw l-eżoċitożi u jirrilaxxaw il-kontenut tagħhom fl-ambjent extraċellulari.
Molekula ta' adeżjoni tal-plejtlets
Sabiex nifhmu aħjar ir-rwol tal-PRP fit-tessuti infjammatorji u l-plejtlits fir-rispons immuni, għandna nifhmu kif riċetturi differenti tal-wiċċ tal-plejtlets (integrini) u molekuli ta 'adeżjoni tal-junction (JAM) u interazzjonijiet taċ-ċelluli jistgħu jibdew proċessi kritiċi fl-immunità intrinsika u adattiva.
L-integrini huma molekuli ta 'adeżjoni mal-wiċċ taċ-ċelluli misjuba f'diversi tipi ta' ċelluli u espressi fi kwantitajiet kbar fuq platelets.L-integrini jinkludu a5b1, a6b1, a2b1 LFA-2, (GPIa/IIa) u aIIbb3 (GPIIb/IIIa).Normalment, jeżistu fi stat statiku u ta 'affinità baxxa.Wara l-attivazzjoni, jaqilbu għall-istat ta 'affinità għolja li torbot ligand.L-integrini għandhom funzjonijiet differenti fuq il-plejtlits u jipparteċipaw fl-interazzjoni tal-plejtlits ma 'diversi tipi ta' ċelluli bojod tad-demm, ċelluli endoteljali u matriċi extraċellulari.Barra minn hekk, il-kumpless GP-Ib-V-IX huwa espress fuq il-membrana tal-plejtlits u huwa r-riċettur ewlieni għall-irbit ma 'von vWF.Din l-interazzjoni timmedja l-kuntatt inizjali bejn il-plejtlits u l-istrutturi subendoteljali esposti.L-integrina tal-plejtlets u l-kumpless GP huma relatati ma 'diversi proċessi infjammatorji u għandhom rwol importanti fil-formazzjoni ta' kumpless tal-plejtlets-lewkoċiti.Speċifikament, integrin aIIbb3 hija meħtieġa biex tifforma kumpless stabbli billi tgħaqqad il-fibrinoġen mar-riċettur tal-antiġenu macrophage 1 (Mac-1) fuq in-newtrofili.
Il-plejtlits, in-newtrofili u ċ-ċelloli endoteljali vaskulari jesprimu molekuli speċifiċi ta 'adeżjoni taċ-ċelluli, imsejħa selectin.Taħt kundizzjonijiet infjammatorji, il-plejtlits jesprimu P-selectin u newtrophil L-selectin.Wara l-attivazzjoni tal-plejtlits, P-selectin jista' jorbot mal-ligand PSGL-1 li jeżisti fuq newtrofili u monoċiti.Barra minn hekk, l-irbit ta 'PSGL-1 jibda reazzjoni tal-kaskata tas-sinjali intraċellulari, li jattiva n-newtrofili permezz ta' integrin newtrofil Mac-1 u antiġen 1 relatat mal-funzjoni tal-limfoċiti (LFA-1).Mac-1 attivat jeħel ma' GPIb jew GPIIb/IIIa fuq il-plejtlits permezz tal-fibrinoġen, u b'hekk jistabbilizza l-interazzjoni bejn in-newtrofili u l-plejtlits.Barra minn hekk, LFA-1 attivat jista 'jikkombina mal-molekula ta' adeżjoni interċellulari tal-plejtlets 2 biex jistabbilizza aktar il-kumpless newtrofil-plejtlits biex jippromwovi adeżjoni fit-tul maċ-ċelloli.
Il-plejtlits u l-lewkoċiti għandhom rwol ewlieni fir-risponsi immuni innati u adattivi
Il-ġisem jista 'jirrikonoxxi korpi barranin u tessuti feruti f'mard akut jew kroniku biex jibda reazzjoni tal-kaskata tal-fejqan tal-feriti u mogħdija infjammatorja.Is-sistemi immuni intrinsiċi u adattivi jipproteġu lill-ospitant mill-infezzjoni, u ċ-ċelluli bojod tad-demm għandhom rwol importanti f'koinċidenza bejn iż-żewġ sistemi.Speċifikament, il-monoċiti, il-makrofaġi, in-newtrofili u ċ-ċelloli naturali killer għandhom rwol ewlieni fis-sistema intrinsika, filwaqt li l-limfoċiti u s-sottogruppi tagħhom għandhom rwol simili fis-sistema immuni adattiva.
Interazzjonijiet tal-plejtlits u l-lewkoċiti f'interazzjonijiet taċ-ċelloli immuni intrinsiċi.Il-plejtlets jinteraġixxu man-newtrofili u l-monoċiti, u finalment ma 'M Φ Interact, aġġusta u jżid il-funzjonijiet effettur tagħhom.Dawn l-interazzjonijiet tal-plejtlits-lewkoċiti jwasslu għal infjammazzjoni permezz ta' mekkaniżmi differenti, inkluż NETosis.Abbrevjazzjonijiet: MPO: myeloperoxidase, ROS: speċi ta 'ossiġnu reattiv, TF: fattur tat-tessut, NET: nassa extraċellulari newtrofili, NF- κ B: Fattur nukleari kappa B, M Φ： Makrofaġi.
Sistema immuni innata
Ir-rwol tas-sistema immuni intrinsika huwa li tidentifika mhux speċifiku mikro-organiżmi invażivi jew frammenti tat-tessuti u tistimula t-tneħħija tagħhom.Meta ċerti strutturi molekulari msejħa riċetturi għar-rikonoxximent tal-mudell tal-espressjoni tal-wiċċ (PRRs) jikkombinaw ma 'mudelli molekulari relatati mal-patoġenu u mudelli molekulari relatati mal-ħsara, is-sistema immuni intrinsika tkun attivata.Hemm ħafna tipi ta 'PRRs, inklużi riċettur simili għal Toll (TLR) u riċettur bħal RIG-1 (RLR).Dawn ir-riċetturi jistgħu jattivaw il-fattur ewlieni ta 'traskrizzjoni kappa B (NF- κ B) Jirregola wkoll aspetti multipli ta' rispons immuni intrinsiku u adattiv.Interessanti, il-plejtlits jesprimu wkoll varjetà ta 'molekuli ta' riċetturi immunoregolatorji fuq il-wiċċ tagħhom u ċitoplasma, bħal P-selectin, ligand CD40 proteina transmembrana (CD40L), ċitokini (bħal IL-1 β、 TGF-β) U TLR speċifiku għall-plejtlets. Għalhekk, il-plejtlits jistgħu jinteraġixxu ma 'diversi ċelluli immuni.
Interazzjoni tal-plejtlets-ċelluli bojod fl-immunità intrinsika
Meta l-plejtlits jidħlu jew jinvadu l-fluss tad-demm jew it-tessut, il-plejtlits huma waħda miċ-ċelloli li l-ewwel jiskopru ħsara endoteljali u patoġeni mikrobjali.Aggregazzjoni tal-plejtlits u tippromwovi r-rilaxx ta 'agonisti tal-plejtlits ADP, trombina u vWF, li tirriżulta f'attivazzjoni tal-plejtlits u l-espressjoni ta' riċetturi tal-plejtlits chemokine C, CC, CXC u CX3C, u b'hekk jikkawżaw plejtlits fis-sit infettat jew korriment.
Is-sistema immuni intrinsika hija ġenetikament predeterminata biex tiskopri invażuri, bħal viruses, batterji, parassiti u tossini, jew feriti u feriti fit-tessuti.Hija sistema mhux speċifika, minħabba li kwalunkwe patoġenu se jiġi identifikat bħala barrani jew mhux innifsu u jinstab malajr.Is-sistema immuni intrinsika tiddependi fuq sett ta 'proteini u fagoċiti, li jagħrfu l-karatteristiċi ppreservati tajjeb tal-patoġeni u jattivaw malajr ir-rispons immuni biex jgħinu jeliminaw l-invażuri, anke jekk l-ospitant qatt ma kien espost għal patoġeni speċifiċi qabel.
In-newtrofili, il-monoċiti u ċ-ċelloli dendritiċi huma l-aktar ċelloli immuni intrinsiċi komuni fid-demm.Ir-reklutaġġ tagħhom huwa meħtieġ għal rispons immuni bikri adegwat.Meta PRP jintuża fil-mediċina riġenerattiva, l-interazzjoni tal-plejtlits-ċelluli bojod tirregola l-infjammazzjoni, il-fejqan tal-feriti u t-tiswija tat-tessuti.TLR-4 fuq il-plejtlits jistimula l-interazzjoni tal-plejtlits-newtrofili, li tirregola l-hekk imsejjaħ lewkocyte ossidattiv tal-fqigħ billi jirregola r-rilaxx ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS) u myeloperoxidase (MPO) min-newtrofili.Barra minn hekk, l-interazzjoni bejn il-plejtlits-newtrofili u d-degranulazzjoni tan-newtrofili twassal għall-formazzjoni ta 'nases newtrofil-extraċellulari (NETs).NETs huma komposti minn nukleu newtrofili u kontenut intraċellulari newtrofili oħra, li jistgħu jaqbdu batterji u joqtluhom permezz ta 'NETosis.Il-formazzjoni ta 'NETs hija mekkaniżmu essenzjali ta' qtil tan-newtrofili.
Wara l-attivazzjoni tal-plejtlits, il-monoċiti jistgħu jemigraw lejn tessuti morda u deġenerattivi, fejn iwettqu attivitajiet ta 'adeżjoni u joħorġu molekuli infjammatorji li jistgħu jbiddlu l-kimotassi u l-proprjetajiet proteolitiċi.Barra minn hekk, il-plejtlits jistgħu jinduċu l-attivazzjoni tal-monocyte NF- κ B biex jirregolaw il-funzjoni effetur tal-monoċiti, li hija l-medjatur ewlieni tar-rispons infjammatorju u l-attivazzjoni u d-divrenzjar taċ-ċelloli immuni.Il-plejtlits jippromwovu aktar it-tifqigħ ossidattiv endoġenu tal-monoċiti biex jippromwovu l-qerda ta 'patoġeni fagoċitiċi.Ir-rilaxx ta 'MPO huwa medjat mill-interazzjoni diretta bejn platelet-monocyte CD40L-MAC-1.Interessanti, meta P-selectin jattiva platelets taħt kundizzjonijiet ta 'tessut infjammatorju akuti u kroniċi, chemokines derivati mill-plejtlits PF4, RANTES, IL-1 β U CXCL-12 jistgħu jipprevjenu l-apoptosi spontanja ta' monoċiti, iżda jippromwovu d-divrenzjar tagħhom f'makrofaġi.
Sistema immuni adattiva
Wara li s-sistema immuni intrinsika mhux speċifika tagħraf il-ħsara mikrobjali jew tat-tessut, is-sistema immuni adattiva speċifika tieħu f'idejha.Sistemi adattivi jinkludu limfoċiti B li jorbtu mal-antiġen (ċelluli B) u limfoċiti T konvenzjonali (Treg) li jikkoordinaw it-tneħħija tal-patoġeni.Iċ-ċelluli T jistgħu jinqasmu bejn wieħed u ieħor f'ċelluli T helper (ċelluli Th) u ċelluli T ċitotossiċi (ċelluli Tc, magħrufa wkoll bħala ċelluli T killer).Iċ-ċelloli Th huma aktar maqsuma f'ċelloli Th1, Th2 u Th17, li għandhom funzjonijiet ewlenin fl-infjammazzjoni.Iċ-ċelloli Th jistgħu joħorġu ċitokini proinfjammatorji (eż. IFN- γ、 TNF- β） U diversi interleukins (eż., IL-17). Huma partikolarment effettivi fil-prevenzjoni ta 'virus intraċellulari u infezzjoni batterjali. Iċ-ċelloli Th jistimulaw il-proliferazzjoni u d-divrenzjar taċ-ċelloli involuti fil- rispons immuni Iċ-ċelluli Tc huma ċelluli effetturi, li jistgħu jeliminaw mikro-organiżmi u ċelluli intraċellulari u extraċellulari mmirati.
Interessanti, iċ-ċelloli Th2 jipproduċu IL-4 u jaffettwaw M Φ Polarizzazzjoni, M Φ Riġenerazzjoni Ggwidata M Φ 2 Fenotip, filwaqt li IFN- γ M Φ Bidla għal M Φ 1 Fenotip infjammatorju, li jiddependi fuq id-doża u l-ħin taċ-ċitokini.Wara li jiġi attivat IL-4, M Φ 2 jinduċi liċ-ċelloli Treg jiddifferenzjaw f'ċelloli Th2, u mbagħad jipproduċi IL-4 addizzjonali (ċirku ta' feedback pożittiv).Iċ-ċelloli Th jikkonvertu M Φ Il-fenotip huwa dirett lejn il-fenotip riġenerattiv b'rispons għal aġenti bijoloġiċi ta 'oriġini tat-tessut.Dan il-mekkaniżmu huwa bbażat fuq l-evidenza li ċ-ċelloli Th għandhom rwol sinifikanti fil-kontroll tal-infjammazzjoni u t-tiswija tat-tessuti.
Interazzjoni tal-plejtlets-ċelluli bojod fl-immunità adattiva
Is-sistema immuni adattiva tuża riċetturi speċifiċi għall-antiġeni u tiftakar patoġeni li ltaqgħu magħhom qabel, u teqredhom meta sussegwentement tiltaqa 'ma' l-ospitanti.Madankollu, dawn ir-risponsi immuni adattivi żviluppaw bil-mod.Konias et al.Juri li l-komponent tal-plejtlits jikkontribwixxi għall-perċezzjoni tar-riskju u t-tiswija tat-tessuti, u li l-interazzjoni bejn il-plejtlits u l-lewkoċiti tippromwovi l-attivazzjoni tar-rispons immuni adattiv.
Matul ir-rispons immuni adattiv, il-plejtlits jippromwovu risponsi monoċiti u makrofaġi permezz ta 'maturazzjoni taċ-ċelluli DC u NK, li jwasslu għal risponsi speċifiċi taċ-ċelluli T u taċ-ċelluli B.Għalhekk, il-komponenti tal-granuli tal-plejtlits jaffettwaw direttament l-immunità adattiva billi jesprimu CD40L, molekula li hija essenzjali biex tirregola r-rispons immuni adattiv.Il-plejtlits permezz ta 'CD40L mhux biss għandhom rwol fil-preżentazzjoni ta' l-antiġen, iżda jaffettwaw ukoll ir-reazzjoni taċ-ċelluli T.Liu et al.Instab li l-plejtlits jirregolaw ir-rispons taċ-ċelluli T CD4 b'mod kumpless.Din ir-regolazzjoni differenzjali tas-sottosettijiet taċ-ċelluli T CD4 tfisser li l-plejtlits jippromwovu ċ-ċelluli T CD4 biex jirrispondu għal stimuli infjammatorji, u b'hekk jipproduċu reazzjonijiet pro-infjammatorji u anti-infjammatorji qawwija.
Il-plejtlits jirregolaw ukoll ir-rispons adattiv medjat miċ-ċelluli B għal patoġeni mikrobjali.Huwa magħruf sew li CD40L fuq ċelluli T CD4 attivati se jqanqlu CD40 ta 'ċelluli B, li jipprovdi t-tieni sinjal meħtieġ għall-attivazzjoni tal-limfoċiti B dipendenti miċ-ċelluli T, konverżjoni sussegwenti tal-allotip, u differenzjazzjoni u proliferazzjoni taċ-ċelluli B.B'mod ġenerali, ir-riżultati juru b'mod ċar il-funzjonijiet varji tal-plejtlits fl-immunità adattiva, li jindikaw li l-plejtlits jgħaqqdu l-interazzjoni bejn iċ-ċelluli T u ċ-ċelluli B permezz ta 'CD40-CD40L, u b'hekk itejbu r-rispons taċ-ċelluli B dipendenti miċ-ċelluli T.Barra minn hekk, il-plejtlits huma sinjuri f'riċetturi tal-wiċċ taċ-ċelluli, li jistgħu jippromwovu l-attivazzjoni tal-plejtlits u jirrilaxxaw numru kbir ta 'molekuli attivi infjammatorji u bijoloġiċi maħżuna f'partiċelli ta' plejtlits differenti, u b'hekk jaffettwaw ir-rispons immuni intrinsiku u adattiv.
Rwol estiż tas-serotonin derivat mill-plejtlits fil-PRP
Serotonin (5-hydroxytryptamine, 5-HT) għandu rwol ewlieni ċar fis-sistema nervuża ċentrali (CNS), inkluża t-tolleranza għall-uġigħ.Huwa stmat li ħafna mill-5-HT uman huwa prodott fil-passaġġ gastrointestinali u mbagħad permezz taċ-ċirkolazzjoni tad-demm, fejn jiġi assorbit mill-plejtlits permezz ta 'trasportatur ta' reuptake tas-serotonin u maħżun f'partiċelli densi f'konċentrazzjoni għolja (65 mmol/L).5-HT huwa newrotrasmettitur u ormon magħruf li jgħin biex jirregola diversi proċessi newropikoloġiċi fis-CNS (5-HT ċentrali).Madankollu, il-biċċa l-kbira ta '5-HT teżisti barra s-CNS (5-HT periferali), u hija involuta fir-regolazzjoni tal-funzjonijiet bijoloġiċi sistemiċi u ċellulari ta' sistemi ta 'organi multipli, inklużi sistemi kardjovaskulari, tal-pulmun, gastrointestinali, uroġenitali u funzjonali tal-plejtlits.5-HT għandu metaboliżmu li jiddependi mill-konċentrazzjoni fuq varjetà ta 'tipi ta' ċelluli, inklużi adipoċiti, ċelluli epiteljali u ċelluli bojod tad-demm.5-HT periferali huwa wkoll modulatur immuni qawwi, li jista 'jistimula jew jinibixxi l-infjammazzjoni u jaffettwa diversi ċelluli immuni permezz tar-riċettur 5-HT speċifiku tiegħu (5HTR).
Mekkaniżmu parakrini u awtokrini ta 'HT
L-attività ta’ 5-HT hija medjata mill-interazzjoni tagħha ma’ 5HTRs, li hija superfamilja b’seba’ membri (5-HT 1 – 7) u mill-inqas 14-il sottotip ta’ riċettur differenti, inkluż il-membru skopert reċentement 5-HT 7, periferali u funzjoni fil-ġestjoni tal-uġigħ.Fil-proċess ta 'degranulation tal-plejtlits, plejtlits attivati inixxu numru kbir ta' 5-HT derivat mill-plejtlits, li jistgħu jippromwovu l-kontrazzjoni vaskulari u jistimulaw l-attivazzjoni ta 'plejtlits u limfoċiti maġenb permezz tal-espressjoni ta' 5-HTR fuq ċelluli endoteljali, ċelluli tal-muskoli lixxi u ċelluli immuni.Pacala et al.L-effett mitotiku ta '5-HT fuq ċelluli endoteljali vaskulari ġie studjat, u ġie ddeterminat il-potenzjal li jiġi promoss it-tkabbir ta' vini tad-demm bil-ħsara billi tiġi stimulata l-anġjoġenesi.Kif dawn il-proċessi huma regolati mhuwiex kompletament ċar, iżda jista 'jinvolvi mogħdijiet differenzjali tas-sinjali f'żewġ direzzjonijiet fil-mikroċirkwit tat-tessuti biex jirregolaw il-funzjonijiet taċ-ċelloli endoteljali vaskulari u taċ-ċelloli tal-muskoli lixxi, fibroblasti u ċelloli immuni permezz ta' riċetturi speċifiċi 5-HT fuq dawn iċ-ċelloli. .Il-funzjoni awtokrina tal-plejtlits 5-HT wara l-attivazzjoni tal-plejtlits ġiet deskritta [REF].Ir-rilaxx ta '5-HT itejjeb l-attivazzjoni tal-plejtlits u r-reklutaġġ ta' plejtlits li jiċċirkolaw, li jwassal għall-attivazzjoni ta 'reazzjonijiet ta' kaskata tas-sinjali u effetturi upstream li jappoġġjaw ir-reattività tal-plejtlits.
Effett immunomodulatorju 5-HT
Aktar u aktar evidenza turi li s-serotonin jista' jkollu rwol f'5HTR differenti bħala modulatur immuni.Skont il-5HTR espress f'diversi lewkoċiti involuti f'reazzjoni infjammatorja, 5-HT derivat mill-plejtlits jaġixxi bħala regolatur immuni kemm fis-sistemi immuni intrinsiċi kif ukoll f'dawk adattivi.5-HT jista 'jistimula l-proliferazzjoni Treg u jirregola l-funzjonijiet taċ-ċelluli B, ċelluli naturali qattiel u newtrofili billi jirrekluta DC u monoċiti fis-sit infjammatorju.Studji reċenti wrew li 5-HT derivat mill-plejtlits jista 'jirregola l-funzjoni taċ-ċelloli immuni taħt kundizzjonijiet speċifiċi.Għalhekk, bl-użu ta 'C-PRP, il-konċentrazzjoni tal-plejtlits hija akbar minn 1 × 10 6/µ L tista' tgħin b'mod sinifikanti biex tittrasporta l-konċentrazzjoni ta '5-HT derivata minn plejtlits kbar għat-tessut.Fil-mikroambjent ikkaratterizzat minn komponenti infjammatorji, PRP jista 'jinteraġixxi ma' diversi ċelluli immuni li għandhom rwol ewlieni f'dawn il-patoloġiji, li jistgħu jaffettwaw ir-riżultati kliniċi.
Figura li turi r-rispons multidimensjonali ta' 5-HT wara l-attivazzjoni ta' plejtlits PRP infjammatorji.Wara l-attivazzjoni tal-plejtlits, il-plejtlits jirrilaxxaw il-granuli tagħhom, inkluż 5-HT fi granuli densi, li għandu firxa wiesgħa ta 'effetti differenzjali fuq diversi ċelloli immuni, ċelloli endoteljali u ċelloli tal-muskoli lixxi.Abbrevjazzjonijiet: SMC: ċelluli tal-muskoli lixxi, EC: ċelluli endoteljali, Treg: limfoċiti T konvenzjonali, M Φ： Makrofaġi, DC: ċelluli dendritiċi, IL: interleukin, IFN- γ： Interferon γ。 Modifikat u adattat minn Everts et al.u Hull et al.
Effett analġeżiku tal-PRP
Il-plejtlits attivati se jirrilaxxaw ħafna medjaturi pro-infjammatorji u anti-infjammatorji, li mhux biss jistgħu jikkawżaw uġigħ, iżda wkoll inaqqsu l-infjammazzjoni u l-uġigħ.Ladarba tiġi applikata, id-dinamika tipika tal-plejtlits tal-PRP tibdel il-mikroambjent qabel it-tiswija u r-riġenerazzjoni tat-tessuti permezz ta 'varjetà ta' mogħdijiet kumplessi relatati mal-anaboliżmu u l-kataboliżmu, il-proliferazzjoni taċ-ċelluli, id-divrenzjar u r-regolamentazzjoni taċ-ċelloli staminali.Dawn il-karatteristiċi ta 'PRP iwasslu għall-applikazzjoni ta' PRP f'diversi kundizzjonijiet patoloġiċi kliniċi normalment assoċjati ma 'uġigħ kroniku (bħal korriment sportiv, mard ortopediku, mard tas-sinsla u ferita kronika kumplessa), għalkemm il-mekkaniżmu eżatt ma ġiex determinat għal kollox.
Fl-2008, Evertz et al.Hija l-ewwel prova kkontrollata randomised li tirrapporta l-effett analġeżiku tal-preparazzjoni PRP, li hija ppreparata mis-saff kannella tar-rata ta 'sedimentazzjoni tal-eritroċiti awtologu u attivata b'trombina awtologa wara kirurġija tal-ispalla.Huma nnutaw tnaqqis sinifikanti fil-punteġġi ta 'skala analoga viżwali, l-użu ta' analġeżiċi bbażati fuq l-opjojdi, u riabilitazzjoni ta 'wara l-operazzjoni aktar ta' suċċess.Ta 'min jinnota li jirriflettu l-effett analġeżiku tal-plejtlits attivati u jispekulaw fuq il-mekkaniżmu tal-plejtlits li jirrilaxxaw 5-HT.Fil-qosor, il-plejtlits huma reqdin f'PRP ippreparat frisk.Wara l-attivazzjoni tal-plejtlits direttament jew indirettament (fattur tat-tessut), il-plejtlits jibdlu l-forma u jipproduċu falza biżżejjed biex jippromwovu l-aggregazzjoni tal-plejtlits.Imbagħad, jirrilaxxaw α- U partiċelli densi intraċellulari.It-tessut trattat b'PRP attivat se jkun invadat minn PGF, ċitokini u liżosomi tal-plejtlits oħra.B'mod aktar speċifiku, meta partiċelli densi jirrilaxxaw il-kontenut tagħhom, se jirrilaxxaw ammont kbir ta '5-HT li jirregola l-uġigħ.F'C-PRP, il-konċentrazzjoni tal-plejtlits hija 5 sa 7 darbiet ogħla minn dik fid-demm periferali.Għalhekk, ir-rilaxx ta '5-HT mill-plejtlits huwa astronomiku.Interessanti, Sprott et al.Ir-rapport osserva li l-uġigħ ttaffi b'mod sinifikanti wara l-acupuncture u l-moxibustion, il-konċentrazzjoni ta '5-HT derivat tal-plejtlits tnaqqset b'mod sinifikanti, u mbagħad il-livell tal-plażma ta' 5-HT żdied.
Fil-periferali, platelets, mast cells u ċelluli endoteljali se jirrilaxxaw 5-HT endoġenu waqt korriment fit-tessuti jew trawma kirurġika.Interessanti, varjetà ta 'riċetturi 5-HT ta' newroni ġew skoperti fiż-żona periferali, li kkonfermaw li 5-HT jista 'jinterferixxi mat-trasmissjoni nociceptive fiż-żona periferali.Dawn l-istudji juru li 5-HT jista 'jaffettwa t-trażmissjoni nociceptive ta' tessuti periferali permezz ta 'riċetturi 5-HT1, 5-HT2, 5-HT3, 5-HT4 u 5-HT7.
Is-sistema 5-HT tirrappreżenta sistema qawwija li tista 'tnaqqas u żżid il-grad ta' uġigħ wara stimulazzjoni ta 'ħsara.Ir-regolazzjoni ċentrali u periferali ta 'sinjali noċiċettivi u bidliet fis-sistema 5-HT ġew irrappurtati f'pazjenti b'uġigħ kroniku.F'dawn l-aħħar snin, numru kbir ta 'studji ffukaw fuq ir-rwol ta' 5-HT u r-riċetturi rispettivi tiegħu fl-ipproċessar u r-regolazzjoni ta 'informazzjoni ta' ħsara, li jirriżultaw f'mediċini bħal inibituri selettivi ta 'reuptake ta' serotonin (SSRI).Din il-mediċina tinibixxi t-teħid mill-ġdid ta 'serotonin fin-newroni presinattiċi wara r-rilaxx ta' serotonin.Taffettwa t-tul u l-intensità tal-komunikazzjoni tas-serotonin u hija trattament alternattiv għall-uġigħ kroniku.Hemm bżonn ta 'aktar riċerka klinika biex tifhem b'mod ċar il-mekkaniżmu molekulari tar-regolamentazzjoni tal-uġigħ 5-HT derivat minn PRP f'mard kroniku u deġenerattiv.
Data oħra biex issolvi l-effett analġeżiku potenzjali tal-PRP tista 'tinkiseb wara t-test tal-mudell tal-annimali analġeżiċi.Il-konklużjonijiet statistiċi komparattivi f'dawn il-mudelli huma ta' sfida minħabba li dawn l-istudji fihom wisq varjabbli.Madankollu, xi studji kliniċi indirizzaw l-effetti noċiċettivi u analġeżiċi tal-PRP.Diversi studji wrew li pazjenti li qed jirċievu trattament għal tendinosi jew tiċrit tar-rotator cuff għandhom ftit serħan mill-uġigħ.B'kuntrast, bosta studji oħra wrew li PRP jista 'jnaqqas jew saħansitra jelimina l-uġigħ ta' pazjenti b'deġenerazzjoni tal-għerq, OA, fasciitis plantar u mard ieħor tas-sieq u tal-għaksa.Il-konċentrazzjoni finali tal-plejtlits u l-kompożizzjoni taċ-ċelluli bijoloġiċi ġew identifikati bħala l-karatteristiċi ewlenin tal-PRP, li jgħinu biex josservaw l-effett analġeżiku konsistenti wara l-applikazzjoni tal-PRP.Varjabbli oħra jinkludu metodu ta 'konsenja PRP, teknoloġija ta' applikazzjoni, protokoll ta 'attivazzjoni tal-plejtlits, livell ta' attività bijoloġika ta 'PGF u ċitokini rilaxxati, tip ta' tessut ta 'applikazzjoni PRP u tip ta' korriment.
Ta 'min jinnota li Kuffler solva l-potenzjal tal-PRP biex itaffi l-uġigħ f'pazjenti b'uġigħ newropatiku kroniku ħafif għal sever, sekondarju għan-nerv mhux riġenerattiv bil-ħsara.L-iskop ta 'dan l-istudju huwa li jinvestiga jekk l-uġigħ newropatiku jistax jitnaqqas jew jonqos minħabba PRP li jippromwovi r-riġenerazzjoni assonali u r-rinervazzjoni tan-nervituri fil-mira.B'mod sorprendenti, fost il-pazjenti li qed jirċievu l-kura, l-uġigħ newropatiku għadu eliminat jew ittaffi mill-inqas sitt snin wara l-kirurġija.Barra minn hekk, il-pazjenti kollha bdew itaffu l-uġigħ fi żmien tliet ġimgħat wara l-applikazzjoni tal-PRP.
Riċentement, ġew osservati effetti PRP analġeżiċi simili fil-qasam tal-feriti u l-kura tal-ġilda wara l-operazzjoni.Interessanti, l-awturi rrappurtaw l-aspetti fiżjoloġiċi ta 'uġigħ fil-feriti assoċjati ma' korriment vaskulari u ipoksja tat-tessut tal-ġilda.Huma ddiskutew ukoll l-importanza tal-anġjoġenesi fl-ottimizzazzjoni tal-ossiġenazzjoni u l-kunsinna tan-nutrijenti.L-istudju tagħhom wera li meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, pazjenti li kienu qed jirċievu trattament PRP kellhom inqas uġigħ u żdiedu b'mod sinifikanti l-anġjoġenesi.Fl-aħħarnett, Johal u l-kollegi tiegħu wettqu reviżjoni sistematika u meta-analiżi u kkonkludew li PRP jista 'jnaqqas l-uġigħ wara li uża PRP f'indikazzjonijiet ortopediċi, speċjalment f'pazjenti li qed jirċievu epikondilite esterna u trattament OA tal-irkoppa.Sfortunatament, dan l-istudju ma speċifikax l-effetti taċ-ċelluli bojod tad-demm, il-konċentrazzjoni tal-plejtlits jew l-użu ta 'attivaturi tal-plejtlits eżoġeni, minħabba li dawn il-varjabbli jaffettwaw l-effettività ġenerali tal-PRP.L-aħjar konċentrazzjoni tal-plejtlits PRP għal serħan massimu mill-uġigħ mhix ċara.Fil-mudell tal-far ta 'tendiniżi, il-konċentrazzjoni tal-plejtlits kienet 1.0 × 10 6 / μ F'L, l-uġigħ jista' jittaffa kompletament, filwaqt li l-serħan mill-uġigħ ikkawżat minn PRP b'nofs il-konċentrazzjoni tal-plejtlits jitnaqqas b'mod sinifikanti.Għalhekk, inħeġġu aktar studji kliniċi biex jinvestigaw l-effetti analġeżiċi ta 'preparazzjonijiet PRP differenti.
PRP u effett anġjoġenesi
Preparazzjonijiet C-PRP f'mediċina riġenerattiva preċiża jippermettu l-kunsinna ta 'bijomolekuli rilaxxati minn konċentrazzjonijiet għolja ta' plejtlits attivati f'siti tat-tessuti fil-mira.Għalhekk, inbdew varjetà ta 'reazzjonijiet ta' kaskata, li jikkontribwixxu għal regolazzjoni immuni fuq il-post, proċess infjammatorju u anġjoġenesi biex jippromwovu l-fejqan u t-tiswija tat-tessuti.
L-anġjoġenesi hija proċess dinamiku f'diversi stadji li jinvolvi l-ġerminazzjoni u l-mikrobastimenti tat-tessuti minn vini tad-demm pre-eżistenti.L-anġjoġenesi mxiet 'il quddiem minħabba varjetà ta' mekkaniżmi bijoloġiċi, inklużi l-migrazzjoni taċ-ċelluli endoteljali, il-proliferazzjoni, id-divrenzjar u d-diviżjoni.Dawn il-proċessi ċellulari huma prerekwiżiti għall-formazzjoni ta 'vini tad-demm ġodda.Huma essenzjali għat-tkabbir ta 'vini tad-demm preeżistenti biex jirrestawraw il-fluss tad-demm u jappoġġaw l-attività metabolika għolja tat-tiswija tat-tessuti u r-riġenerazzjoni tat-tessuti.Dawn il-vini tad-demm ġodda jippermettu l-kunsinna ta 'ossiġnu u nutrijenti, u t-tneħħija ta' prodotti sekondarji minn tessuti trattati.
L-attività tal-anġjoġenesi hija regolata billi tistimula l-fattur anġjoġeniku VEGF u l-fatturi anti-anġjoġeniċi (eż., angiostatin u thrombospondin-1 [TSP-1]).Fil-mikroambjent morda u degradat (inkluża tensjoni baxxa ta 'ossiġnu, pH baxx u livell għoli ta' aċidu lattiku), fatturi anġjoġeniċi lokali se jirrestawraw l-attività ta 'anġjoġenesi.
Diversi midja solubbli tal-plejtlets, bħal FGF bażiku u TGF- β U VEGF jistgħu jistimulaw ċelluli endoteljali biex jipproduċu vini tad-demm ġodda.Landsdown u Fortier irrappurtaw diversi riżultati relatati mal-kompożizzjoni tal-PRP, inklużi s-sorsi intraplatelet ta 'ħafna regolaturi anġjoġeniċi.Barra minn hekk, huma kkonkludew li ż-żieda tal-anġjoġenesi tikkontribwixxi għall-fejqan tal-marda MSK f'żoni b'vaskularizzazzjoni fqira, bħal tiċrita tal-menisku, korriment tal-għerq u żoni oħra b'vaskularizzazzjoni fqira.
Il-promozzjoni u l-proprjetajiet tal-plejtlits anti-anġjoġeniċi
Fl-aħħar ftit deċennji, studji ppubblikati wrew li l-plejtlits għandhom rwol ewlieni fl-emostasis primarja, il-formazzjoni ta 'emboli, il-fattur tat-tkabbir u r-rilaxx taċ-ċitokini, u r-regolamentazzjoni tal-anġjoġenesi bħala parti mill-proċess tat-tiswija tat-tessuti.Paradossalment, PRP α- Il-granuli fihom armament ta 'fatturi ta' tkabbir pro-anġjoġeniċi, proteini anti-anġjoġeniċi u ċitokini (bħal PF4, inibitur tal-attivatur tal-plażminoġenu-1 u TSP-1), u jimmiraw ir-rilaxx ta 'fatturi speċifiċi li għandhom rwol. .Rwol fl-anġjoġenesi.Għalhekk, ir-rwol tal-PRP fil-kontroll tar-regolazzjoni tal-anġjoġenesi jista 'jiġi definit mill-attivazzjoni ta' riċetturi speċifiċi tal-wiċċ taċ-ċelluli, TGF- β Ibda reazzjonijiet pro-anġjoġeniċi u anti-anġjoġeniċi.Il-kapaċità tal-plejtlits li jeżerċitaw il-mogħdija tal-anġjoġenesi ġiet ikkonfermata fl-anġjoġenesi patoloġika u l-anġjoġenesi tat-tumur.
Fattur tat-tkabbir anġjoġeniku derivat mill-plejtlets u fattur tat-tkabbir anti-anġjoġeniku, derivat minn α- U molekuli densi u adeżivi.L-aktar importanti, huwa ġeneralment aċċettat li l-effett ġenerali tal-plejtlits fuq l-anġjoġenesi huwa pro-anġjoġeniku u stimulanti.Huwa mistenni li t-terapija PRP tikkontrolla l-induzzjoni tal-anġjoġenesi, li tikkontribwixxi għall-effett tat-trattament ta 'ħafna mard, bħall-fejqan tal-feriti u t-tiswija tat-tessuti.L-amministrazzjoni ta 'PRP, aktar speċifikament l-amministrazzjoni ta' PGF ta 'konċentrazzjoni għolja u ċitokini tal-plejtlits oħra, tista' tinduċi anġjoġenesi, anġjoġenesi u arterjoġenesi, minħabba li l-fattur 1a derivat minn ċelluli stromali jeħel mar-riċettur CXCR4 fuq ċelluli proġenitriċi endoteljali.Bill et al.Huwa ssuġġerit li PRP iżid in-neovaskularizzazzjoni iskemika, li tista 'tkun dovuta għal stimulazzjoni ta' anġjoġenesi, anġjoġenesi u arterjoġenesi.Fil-mudell in vitro tagħhom, il-proliferazzjoni taċ-ċelluli endoteljali u l-formazzjoni kapillari ġew indotti minn numru kbir ta 'PDGs differenti, li minnhom VEGF kien l-istimulatur anġjoġeniku ewlieni.Fattur ieħor importanti u essenzjali għar-restawr tal-mogħdija tal-anġjoġenesi hija s-sinerġija bejn PGFs multipli.Richardson et al.Ġie ppruvat li l-attività sinerġistika tal-fattur ta 'tkabbir derivat mill-plejtlits tal-fattur anġjoġeniku-bb (PDGF-BB) u VEGF wasslet għall-formazzjoni rapida ta' netwerk vaskulari matur meta mqabbel mal-attività tal-fattur tat-tkabbir individwali.L-effett kombinat ta 'dawn il-fatturi kien ikkonfermat reċentement fi studju dwar it-titjib taċ-ċirkolazzjoni kollaterali ċerebrali fil-ġrieden b'ipoperfużjoni fit-tul.
L-aktar importanti, studju in vitro kejjel l-effett proliferattiv taċ-ċelluli endoteljali tal-vina umbilikali umana u diversi konċentrazzjonijiet tal-plejtlits fuq l-għażla tal-apparat ta’ preparazzjoni PRP u l-istrateġija tad-doża tal-plejtlits, u r-riżultati wrew li l-aħjar doża tal-plejtlits kienet 1.5 × 10 6 plejtlits / μ 50. Biex tippromwovi anġjoġenesi.Konċentrazzjoni għolja wisq tal-plejtlits tista 'tinibixxi l-proċess ta' anġjoġenesi, għalhekk l-effett huwa fqir.
Tixjiħ taċ-ċelluli, tixjiħ u PRP
Is-senescence taċ-ċelluli tista 'tiġi indotta minn stimuli varji.Dan huwa proċess li fih iċ-ċelluli jieqfu jinqasmu u jgħaddu minn bidliet fenotipiċi uniċi biex jipprevjenu t-tkabbir mhux ristrett ta 'ċelluli bil-ħsara, li għandu rwol importanti fil-prevenzjoni tal-kanċer.Fil-proċess ta 'tixjiħ fiżjoloġiku, it-tixjiħ tar-replikazzjoni taċ-ċelluli se jippromwovi wkoll it-tixjiħ taċ-ċelluli, u l-kapaċità ta' riġenerazzjoni tal-MSCs titnaqqas.
Effetti tat-tixjiħ u t-tixjiħ taċ-ċelluli
In vivo, ħafna tipi ta 'ċelluli se jixjieħu u jakkumulaw f'diversi tessuti matul ix-xjuħija, fosthom hemm numru kbir ta' ċelluli li qed jixjieħu.L-akkumulazzjoni ta 'ċelluli li qed tixjieħ tidher li tiżdied maż-żieda fl-età, ħsara lis-sistema immuni, ħsara fit-tessuti jew fatturi relatati mal-istress.Il-mekkaniżmu tat-tixjiħ ċellulari ġie identifikat bħala l-fattur patoġeniku ta 'mard relatat ma' l-età, bħal osteoartrite, osteoporożi u deġenerazzjoni tad-diska intervertebrali.Varjetà ta 'stimoli se jaggravaw it-tixjiħ taċ-ċelluli.Bi tweġiba, il-fenotip sekretorju relatat mas-senescence (SASP) se joħroġ konċentrazzjonijiet għoljin ta 'ċelluli tal-proteini u ċitokini.Dan il-fenotip speċjali huwa relatat ma 'ċelluli li qed tixjieħ, li fihom inixxu livelli għoljin ta' ċitokini infjammatorji (bħal IL-1, IL-6, IL-8), fatturi tat-tkabbir (bħal TGF- β、 HGF, VEGF, PDGF), MMP, u cathepsin.Meta mqabbel maż-żgħażagħ, ġie ppruvat li SAPS jiżdied bl-età, minħabba li l-proċess ta 'stat stabbli jinqered, li jirriżulta fit-tixjiħ taċ-ċelluli u kapaċità mnaqqsa ta' riġenerazzjoni.Speċifikament, f'mard tal-ġogi u mard tal-muskoli skeletriċi.F'dan ir-rigward, it-tixjiħ immuni huwa meqjus bħala bidla sinifikanti fl-ispettru ta 'sekrezzjoni ta' ċelloli immuni, li jindika li l-konċentrazzjoni ta 'TNF-a, IL-6 u/jew Il-1b tiżdied, li twassal għal infjammazzjoni kronika ta' grad baxx.Ta 'min jinnota li d-disfunzjoni taċ-ċelluli staminali hija wkoll relatata ma' mekkaniżmi awtonomi mhux ċellulari, bħal ċelloli li qed jixjieħu, speċjalment il-produzzjoni ta 'fatturi pro-infjammatorji u anti-riġenerattivi permezz ta' SASP.
Għall-kuntrarju, SASP jista 'wkoll jistimula l-plastiċità taċ-ċelluli u l-ipprogrammar mill-ġdid ta' ċelloli adjaċenti.Barra minn hekk, SASP jista 'jorganizza l-komunikazzjoni ma' diversi medjaturi immuni u jattiva ċelloli immuni biex jippromwovi t-tneħħija taċ-ċelloli li qed jixjieħu.Il-fehim tar-rwol u l-funzjoni taċ-ċelluli li qed tixjieħ se jikkontribwixxi għall-fejqan u t-tiswir mill-ġdid tat-tessuti tal-muskoli MSK u l-feriti kroniċi.
Ta’ min jinnota li Ritcka et al.Twettaq studju estensiv, u r-rwol ewlieni u ta 'benefiċċju ta' SASP fil-promozzjoni tal-plastiċità taċ-ċelluli u r-riġenerazzjoni tat-tessuti ġie skopert, u ġie introdott il-kunċett ta 'twassil ta' trattament temporanju ta 'ċelloli li qed jixjieħu.Huma semmew b'kawtela li t-tixjiħ huwa prinċipalment proċess ta 'benefiċċju u riġenerattiv.
Tixjiħ taċ-ċelluli u potenzjal tal-PRP
Hekk kif in-numru ta 'ċelloli staminali jonqos, it-tixjiħ se jaffettwa l-prestazzjoni taċ-ċelloli staminali.Bl-istess mod, fil-bnedmin, il-karatteristiċi taċ-ċelloli staminali (bħal nixfa, proliferazzjoni u differenzjazzjoni) jonqsu wkoll bl-età.Wang u Nirmala irrappurtaw li t-tixjiħ inaqqas il-karatteristiċi taċ-ċelloli staminali taċ-ċelluli tat-tendon u n-numru ta 'riċetturi tal-fattur tat-tkabbir.Studju fuq l-annimali wera li l-konċentrazzjoni ta’ PDGF fi żwiemel żgħar kienet għolja.Huma kkonkludew li ż-żieda fin-numru ta 'riċetturi GF u n-numru ta' GF f'individwi żgħażagħ jista 'jkollhom rispons ċellulari aħjar għat-trattament PRP minn individwi anzjani f'individwi żgħażagħ.Dawn is-sejbiet jiżvelaw għaliex it-trattament PRP jista 'jkun inqas effettiv jew saħansitra ineffettiv f'pazjenti anzjani b'inqas ċelloli staminali u "kwalità fqira".Ġie ppruvat li l-proċess ta 'tixjiħ tal-qarquċa li qed tixjieħ huwa maqlub u l-perjodu ta' mistrieħ tal-kondroċiti jiżdied wara l-injezzjoni PRP.Jia et al.Jintuża biex jistudja fibroblasti dermali tal-ġrieden in vitro fotoaging, bi u mingħajr trattament PRP, biex jiċċara l-mekkaniżmu ta 'kontraazzjoni PGF f'dan il-mudell.Il-grupp PRP wera effett dirett fuq il-matriċi extraċellulari, żied il-collagen tat-tip I u naqqas is-sintesi ta 'metalloproteinases, li jindika li PRP jista' jikkontrobattu t-tixjiħ taċ-ċelluli, u wkoll f'mard deġenerattiv MSK.
Fi studju ieħor, PRP intuża biex jiġbor ċelloli staminali tal-mudullun tal-għadam minn ġrieden età.Ġie determinat li PRP jista 'jirkupra varjetà ta' funzjonijiet taċ-ċelluli staminali mit-tixjiħ, bħall-proliferazzjoni taċ-ċelluli u l-formazzjoni ta 'kolonji, u jibni mill-ġdid il-markaturi relatati mat-tixjiħ taċ-ċelluli.
Riċentement, Oberlohr u l-kollegi tiegħu studjaw b'mod estensiv ir-rwol tat-tixjiħ taċ-ċelluli fid-dgħajjef tar-riġenerazzjoni tal-muskoli, u evalwaw PRP u plażma fqira tal-plejtlits (PPP) bħala għażliet ta 'trattament bijoloġiku għat-tiswija tal-muskoli skeletriċi.Huma ħasbu li t-trattament PRP jew PPP għat-tiswija tal-muskoli skeletriċi tkun ibbażata fuq fatturi bijoloġiċi apposta għal markaturi ta 'ċelluli speċifiċi SASP u fatturi oħra li jwasslu għall-iżvilupp tal-fibrożi.
Huwa raġonevoli li wieħed jemmen li qabel l-applikazzjoni tal-PRP, it-tixjiħ taċ-ċelluli mmirati jista 'jtejjeb il-karatteristiċi ta' riġenerazzjoni tal-effikaċja tat-trattament bijoloġiku billi jnaqqas il-fatturi SASP lokali.Ġie ssuġġerit li għażla oħra biex jittejbu r-riżultati tat-trattament PRP u PPP għar-riġenerazzjoni tal-muskoli skeletriċi hija li tneħħi b'mod selettiv iċ-ċelloli li qed jixjieħu bi kenniesa li qed tixjieħ.M'hemm l-ebda dubju li r-riżultati riċenti tar-riċerka dwar l-effett tal-PRP fuq it-tixjiħ u t-tixjiħ taċ-ċelluli huma affaxxinanti, iżda għadhom fl-istadju inizjali.Għalhekk, mhuwiex raġonevoli li tagħmel xi suġġerimenti f'dan il-ħin.
（Il-kontenut ta 'dan l-artikolu huwa stampat mill-ġdid, u aħna ma nipprovdu l-ebda garanzija espressa jew impliċita għall-eżattezza, l-affidabbiltà jew il-kompletezza tal-kontenut li jinsab f'dan l-artikolu, u mhumiex responsabbli għall-opinjonijiet ta' dan l-artikolu, jekk jogħġbok fhimt.）
Ħin tal-post: Mar-01-2023